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基于qPCR 检测技术的miRNA 表达及差异分析是对测序、芯片结果的有效补充与验证,是进一步确定研究对象并做后续功能研究或生物标志物筛选的基础。

锐博生物自主开发了Bulge-Loop™ 和miDETECT A Track™ 以及用于两种不同的 miRNA qPCR检测方法的试剂盒、引物及提供对照,拥有颈环法和加尾法qPCR检测方法的专利技术。【高灵敏度小RNA定量检测方法及试剂盒,专利授权号:CA201410039162.6】

产品优势

锐博生物专利:高灵敏度小RNA定量检测方法及试剂盒.  授权专利号:CA201410039162.6

Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR
1、高特异性,采用具有茎凸环结构的逆转录引物以和高特异miRNA正向引物,确保该方法的特异性,能准确检测出高度同源的miRNA
2、高灵敏度,比传统的miRNA 定量检测方法具有更宽广的动态变化范围,无需担心因样品量少或者miRNA 表达量低而无法精确检测
3、高准确性,可验证微阵列表达谱数据的准确性,有效地检测出miRNA 表达量,且重复性高。

Bulge-Loop miRNA颈环法引物套装包括:Bulge-Loop RT primer、Forward primer和Reverse primer。

miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR
1、灵敏度高,精确定量miRNA表达量
2、特异性好,甚至可准确区分miRNA 成熟链和前体
3、节省样本,一次转录可同时检测多种miRNA 及其他各种RNA
4、适用于各种样品的miRNA 表达谱检测

miDETECT A miRNA加尾法引物:Forward Primer。

哪种miRNA qPCR检测方法更适合您?
Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCRmiDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR
检测方法SYBR Green 染料法SYBR Green 染料法
灵敏度能检测总RNA 量≥10ng样品中的miRNA 表达量准确鉴定总RNA 量≥10ng样品中的miRNA 表达量
PCR 步骤特异性PCR 正向引物(与 miRNA 部分序列匹配)特异性PCR 正向引物(与 miRNA 全部序列匹配)
特异性最大能分辨仅有一个碱基差别的miRNA能分辨绝大部分成熟miRNA
特点特异性强,灵敏度高 特异地检测较低样本量中的目的miRNA通用性强,节省样本 单个样本可同时检测大量miRNA 及其他类型RNA
反转录步骤特异性RT 引物(每个 miRNA 需要单独RT)针对Poly(A) 化RNA 的通用型RT 引物
技术支持

miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR能够准确检测miRNA表达量,并在较宽的定量区间内得到很好的标准曲线,检测限度从1fM 至100pM,适合进行miRNA 准确定量检测。

以 6 个数量级连续梯度(1fM, 10fM, 100fM, 1pM, 10pM, 100pM)稀释的miRNA 标准品(hsa-miR-16、hsa-miR-21)进行miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR 检测,每个梯度3 个平行样,扩增效率(E)超过96%,检测相关性(R2)达到1.00,灵敏、准确。

miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR 采用特异性优化的设计算法,能够将单个样品中的多种RNA 通过通用的Poly(A) Tailing 和Uni-RT 反应,及特异性qPCR 检测,可准确区分序列相似的miRNA 成熟链,重复性好,可信度高,甚至能区分大部分成熟体和前体。

分别以8 个10pM 的miDETECT™ miRNA qRT-PCR Standard RNA 为模板,采用8 种miDETECT A Track™ miRNA引物进行特异性qRT-PCR 检测,结果表明仅对应的miRNA 引物能够特异性检测,无非特异性扩增现象出现。

A:miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR 检测扩增曲线; B:引物特异性统计分析结果

由于对样品进行的Poly(A) Tailling 和Uni-RT 具有通用性,所以经过一次反转录得到的产物即可检测mature miRNA、miRNA precursor、snoRNA、snRNA、piRNA、lncRNA 和mRNA ( 注:引物需要特殊设计) 等多种RNA,检测结果准确且重复性高。

样品中总RNA 采用miDETECT A Track™ miRNA qRT-PCR 方法检测miRNA(hsa-miR-638、hsa-miR-760、hsa-miR-1207、hsa-miR-4281),snRNA(U6),lncRNA(7SL1) 为模板,准确定量检测多种RNA 的表达量。

参考文献

[1] Wu P, Cai J, Chen Q, et al. Lnc-TALC promotes O 6-methylguanine-DNA methyltransferase expression via regulating the c-Met pathway by competitively binding with miR-20b-3p[J]. Nature communications, 2019, 10(1): 2045. (IF:11.878 锐博产品:miRNA茎环法qRT-PCR试剂盒 研究领域:胶质母细胞瘤 哈尔滨医科大学第二附属医院)
[2] Liu L, Liu Y, Feng C, et al. Lithium-containing biomaterials stimulate bone marrow stromal cell-derived exosomal miR-130a secretion to promote angiogenesis[J]. Biomaterials, 2019, 192: 523-536. (IF:10.273 锐博产品:miRNA加尾法qRT-PCR试剂盒 研究领域:血管生成 上海交通大学医学院)
[3] Wang C, Xu W, An J, et al. Poly (ADP-ribose) polymerase 1 accelerates vascular calcification by upregulating Runx2[J]. Nature communications, 2019, 10(1): 1203. (IF:11.878 锐博产品:miRNA茎环法引物 研究领域:血管钙化 华中科技大学同济医学院协和医院)
[4] Sun C, Lan P, Han Q, et al. Oncofetal gene SALL4 reactivation by hepatitis B virus counteracts miR-200c in PD-L1-induced T cell exhaustion[J]. Nature communications, 2018, 9(1): 1241. (IF:11.878 锐博产品:miRNA茎环法引物 研究领域:乙肝病毒 华中科技大学)
[5] Wu Z R, Yan L, Liu Y T, et al. Inhibition of mTORC1 by lncRNA H19 via disrupting 4E-BP1/Raptor interaction in pituitary tumours[J]. Nature communications, 2018, 9(1): 4624. (IF:11.878 锐博产品:miRNA引物 研究领域:垂体肿瘤 上海交通大学医学院)

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miRNA qRT-PCR试剂盒
产品编号 产品名称目录价数量操作
C00021-1 Random Primer(N6,100uM,200uL)¥40.00
C00022-1 Oligo(dT)18(50uM,50uL)¥10.00
C10712-1 miDETECT A Track miRNA qRT-PCR Starter Kit(20T ployA+20T RT+200T qPCR )¥2,108.00
C10712-2 miDETECT A Track miRNA qRT-PCR Starter Kit(100T ployA+100T RT+1000T qPCR )¥7,988.00
C10712-3 miDETECT A Track miRNA qRT-PCR Starter Kit(500T ployA+500T RT+5000T qPCR ) )¥31,660.00
C10711 miDETECT A Track miRNA qPCR Kit(200T qPCR )¥1,598.00
C10211-1 Bulge-Loop miRNA qRT-PCR Starter Kit (20T RT + 60T qPCR )¥1,148.00
C10211-2 Bulge-Loop miRNA qRT-PCR Starter Kit (100T RT + 300T qPCR )¥4,148.00
C10211-3 Bulge-Loop miRNA qRT-PCR Starter Kit (500T RT + 1500T qPCR )¥16,300.00
miRNA qPCR试剂盒为低温运输,如果购买试剂盒则中国境内不收干冰和低温运费。若单独订购Random Primer或Oligo(dT)则为常温运输。
miRNA qRT-PCR茎环法引物套装
产品编号 产品名称目录价数量操作
MQPS0002580-1-200 Bulge-Loop mmu-miR-199b-5p Primer Set,200T¥450.00
MQPS0000133-1-200 Bulge-Loop Cynoglossus semilaevis-miR-2014-5p Primer Set,200T¥450.00
MQPS0000261-1-200 Bulge-Loop eca-miR-34a Primer Set,200T¥450.00
MQPS0000389-1-200 Bulge-Loop h-hsa-mir-30e Primer Set,200T¥450.00
MQPS0000773-1-200 Bulge-Loop hsa-miR-19a-3p Primer Set,200T¥450.00
MQPS0000901-1-200 Bulge-Loop hsa-miR-297 Primer Set,200T¥450.00
MQPS0001029-1-200 Bulge-Loop hsa-miR-3190-3p Primer Set,200T¥450.00
MQPS0001157-1-200 Bulge-Loop hsa-miR-3677-3p Primer Set,200T¥450.00
MQPS0001285-1-200 Bulge-Loop hsa-miR-4269 Primer Set,200T¥450.00
MQPS0001413-1-200 Bulge-Loop hsa-miR-4497 Primer Set,200T¥450.00

Bulge-Loop miRNA颈环法引物套装包括:Bulge-Loop RT primer、Forward primer和Reverse primer。

miRNA qRT-PCR加尾法引物
产品编号 产品名称目录价数量操作
miRA0000010-1-100 miDETECT A Track cel-miR-39-3p Forward Primer,100T¥320.00
miRA0000010-1-200 miDETECT A Track cel-miR-39-3p Forward Primer,200T¥400.00
miRA0000069-1-100 miDETECT A Track hsa-miR-16-5p Forward Primer,100T¥320.00
miRA0000069-1-200 miDETECT A Track hsa-miR-16-5p Forward Primer,200T¥400.00
miRA0000076-1-100 miDETECT A Track hsa-miR-21-5p Forward Primer,100T¥320.00
miRA0000076-1-200 miDETECT A Track hsa-miR-21-5p Forward Primer,200T¥400.00
miRA0000421-1-100 miDETECT A Track hsa-miR-122-5p Forward Primer,100T¥320.00
miRA0000421-1-200 miDETECT A Track hsa-miR-122-5p Forward Primer,200T¥400.00
miRA0000423-1-100 miDETECT A Track hsa-miR-125b-5p Forward Primer,100T¥320.00
miRA0000423-1-200 miDETECT A Track hsa-miR-125b-5p Forward Primer,200T¥400.00
miRNA qRT-PCR加尾法对照引物
产品编号 产品名称目录价数量操作
miRAN0001-1-100 miDETECT A Track 5S Forward Primer,100T¥160.00
miRAN0002-1-100 miDETECT A Track U6 Forward Primer,100T¥160.00
miRAN0003-1-100 miDETECT A Track RNU5A Forward Primer,100T¥160.00
miRAN0004-1-100 miDETECT A Track h-SNORD48 Forward Primer,100T¥160.00
miRAN0005-1-100 miDETECT A Track h-SNORD44 Forward Primer,100T¥160.00
miRAN0001-1-200 miDETECT A Track 5S Forward Primer,200T¥200.00
miRAN0002-1-200 miDETECT A Track U6 Forward Primer,200T¥200.00
miRAN0003-1-200 miDETECT A Track RNU5A Forward Primer,200T¥200.00
miRAN0004-1-200 miDETECT A Track h-SNORD48 Forward Primer,200T¥200.00
miRAN0005-1-200 miDETECT A Track h-SNORD44 Forward Primer,200T¥200.00
miRNA qRT-PCR茎环法对照引物
产品编号 产品名称目录价数量操作
MQPS0000001-1-100 Bulge-Loop 5S qPCR Primer Set,100T¥120.00
MQPS0000002-1-100 Bulge-Loop U6 qPCR Primer Set,100T¥120.00
MQPS0000003-1-100 Bulge-Loop 7SL qPCR Primer Set,100T¥120.00
MQPS0000004-1-100 Bulge-Loop h-SNORD48 qPCR Primer Set,100T¥120.00
MQPS0000005-1-100 Bulge-Loop h-SNORD44 qPCR Primer Set,100T¥120.00
MQPS0000001-1-200 Bulge-Loop 5S qPCR Primer Set,200T¥200.00
MQPS0000002-1-200 Bulge-Loop U6 qPCR Primer Set,200T¥200.00
MQPS0000003-1-200 Bulge-Loop 7SL qPCR Primer Set,200T¥200.00
MQPS0000004-1-200 Bulge-Loop h-SNORD48 qPCR Primer Set,200T¥200.00
MQPS0000005-1-200 Bulge-Loop h-SNORD44 qPCR Primer Set,200T¥200.00
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